抗日戰爭期間，由於葡萄牙宣布澳門在中日戰爭中保持“中立”，因此，當時的澳門與香港一樣，都成了廣州及附近地區人員的避難地區。而且廣州當局還將澳門列為學校疏散區，自內地遷入中學、中專30余所，同時流寓澳門的教育界人士，也與澳門天主教會創辦了不少新學校，收容內地入澳的青年入學。1939年10月，日軍在深圳大亞灣登陸，發動廣州戰役，迅速攻陷廣州等地，使入澳的難民更多達25萬人之眾。據中華民國僑務委員會的資料顯示，1939年全澳共有中學、中專36間，學生30000餘人；小學140余間，學生人數約3、4萬人，是澳門80年代之前教育最發達的時代。直到1941年底香港淪陷日軍之手後，學校數量才由140余間降至40間左右。
1937年8月，澳門愛國人士組織了“澳門四界救災會”（四界即：學術界、音樂界、戲劇界、體育界，是澳門在抗日戰爭時期最大的愛國團體），以“救災”為名，在澳門展開了一系列的“抗日救亡”活動，直到1941年冬才停止一切活動。
抗戰期間，澳門因保持中立而獲得空前的繁榮，歐美及東南亞的物資，源源不斷地輸入澳門，並通過澳門轉運入中國內地。此時澳門的界址不明成為對中葡雙方都非常有利的因素。因為澳門位處的西江流域出海地區，不但河道縱橫，而且海口眾多，外海島嶼星羅棋佈，內陸桑田魚塘果園密集，最適宜走私活動，日軍由於人數有限而無法進行阻攔。再加上界址不明，日方連批評葡方縱容走私的機會都沒有。不過，日軍並未完全尊重澳門的中立地位。澳葡當局在日軍的強大壓力下，也不得不與日軍存在一定程度的妥協，嚴禁中國人民在澳門進行任何抗日活動。同時，澳葡以中立國的身份，也為日軍侵華提供了方便。他們一方面允許日艦停泊澳門港並供應其給養，任由日軍假道澳門入侵中山縣；另一方面卻極力反對中國在澳門附近設防。（轉載自光明日報社主辦的光明網）